流式細(xì)胞儀是一(yī)種(zhǒng)廣泛應用於生物醫學研究和臨(lín)床(chuáng)診(zhěn)斷的分析(xī)儀(yí)器(qì),能夠高(gāo)效(xiào)地(dì)對單個細胞(bāo)或(huò)其他微小(xiǎo)顆(kē)粒進(jìn)行(háng)快速,定量的多參數分析。它(tā)結(jié)合(hé)了流體力(lì)學(xué),光學原理以及(jí)計(jì)算機(jī)技術,通(tōng)過(guò)對(duì)細胞(bāo)的大(dà)小,顆粒(lì)結構,表麵(miàn)標誌物等特征(zhēng)進行分(fēn)析,能(néng)夠為(wéi)研究人員(yuán)提供(gōng)極為(wéi)豐富的信息。具有高通(tōng)量(liáng),高靈(líng)敏度,實時性(xìng)強等優點,因此被廣泛應(yīng)用於(yú)免疫學,腫瘤學,血液(yè)學(xué),分子生物(wù)學(xué)等領(lǐng)域。
1.細(xì)胞懸(xuán)浮液(yè)的(dí)製備:
細胞樣(yàng)本(běn)通(tōng)常(cháng)需要在(zài)使用前進行分散成(chéng)單(dān)個細胞懸(xuán)液。這是因為細胞儀(yí)通(tōng)過(guò)流(liú)動(dòng)的液(yè)流將(jiāng)細(xì)胞(bāo)逐一(yī)引入(rù)檢測通道。細胞(bāo)懸液的質量(liáng)對實驗(yàn)結果(guǒ)的(dí)準確性(xìng)至(zhì)關重要(yào)。
2.流動(dòng)通道與單細(xì)胞對(duì)齊(qí):
采用了(liǎo)狹(xiá)窄的(dí)流(liú)動通道,利用流體(tǐ)動力學原(yuán)理確(què)保細胞懸液中(zhōng)的細胞按(àn)順序逐(zhú)一經過(guò)激光束(shù)。每個細胞通過(guò)激光(guāng)照(zhào)射時,都會產(chǎn)生不同的光散射和(hé)熒光信號。
3.光(guāng)散(sàn)射(shè)與熒光(guāng)檢(jiǎn)測(cè):
通過激光束(shù)照(zhào)射流動的細胞(bāo),並通(tōng)過前(qián)向(xiàng)散射(shè)光(FSC)和(hé)側向(xiàng)散射光(guāng)(SSC)來(lái)測(cè)定(dìng)細胞的大(dà)小和形態(tài)。前向散射光代(dài)表細胞(bāo)的大(dà)小,側(cè)向(xiàng)散射(shè)光(guāng)反映細胞內部(bù)的(dí)結構(gòu)復雜性,如(rú)顆粒數量和形態。
除(chú)了(liǎo)光散射(shè)信(xìn)號,還可利(lì)用(yòng)熒光標記(jì)物對細(xì)胞(bāo)表麵,細(xì)胞(bāo)內或(huò)核內特定(dìng)分子(zǐ)進(jìn)行標記。當這些標記物被激光(guāng)激發(fā)時(shí),細胞(bāo)會發出熒光信號,可(kě)精(jīng)確檢測(cè)這些信(xìn)號並分(fēn)析不同(tóng)的熒光(guāng)顏(yán)色(sè)。通過對不(bù)同熒(yíng)光(guāng)信號的分(fēn)析,研(yán)究人(rén)員可(kě)以(yǐ)同(tóng)時(shí)檢(jiǎn)測到多(duō)個(gè)細胞特(tè)征(zhēng),如表(biǎo)麵抗原(yuán)的(dí)表(biǎo)達,細胞(bāo)周(zhōu)期的(dí)變化(huà),細(xì)胞(bāo)內鈣離子濃(nóng)度(dù)等(děng)。
4.信(xìn)號(hào)處理(lǐ)與(yǔ)數據分(fēn)析(xī):
信號檢(jiǎn)測(cè)係統能夠快速(sù)獲取每個細胞的多項數據(jù),這些(xiē)數據隨後會傳送(sòng)到計算(suàn)機進行處理和(hé)分析。分(fēn)析軟(ruǎn)件(jiàn)根據預設的(dí)參(cān)數進行數(shù)據篩(shāi)選,聚(jù)類和統計分析(xī),最終(zhōng)生成各種(zhǒng)圖(tú)形和統計報告。這(zhè)些數(shù)據可(kě)以(yǐ)幫助研(yán)究(jiū)人(rén)員對細(xì)胞群體的(dí)特征進(jìn)行(háng)深(shēn)度分析,如不(bù)同細胞群(qún)體的(dí)分布(bù),表型(xíng)特征(zhēng)的差異等(děng)。
流式細胞儀的(dí)關鍵技(jì)術(shù):
1.多參數(shù)分析:
傳統的細(xì)胞(bāo)分(fēn)析技術通常隻(zhī)能分析單一參數,如(rú)細(xì)胞大(dà)小(xiǎo)或(huò)顆(kē)粒性。而細(xì)胞(bāo)儀則能夠(gòu)同時分(fēn)析多(duō)個(gè)參(cān)數,能(néng)夠(gòu)提(tí)供更為全(quán)麵的細胞(bāo)信(xìn)息。例如,研(yán)究(jiū)人(rén)員可以通過(guò)多(duō)重熒光(guāng)標記(jì)分析(xī)細胞表(biǎo)麵不(bù)同抗原(yuán)的(dí)表(biǎo)達,從(cóng)而獲取細胞的(dí)多個表型特(tè)征(zhēng)。
2.高(gāo)通量(liáng)檢(jiǎn)測(cè):
檢(jiǎn)測速度(dù)極快(kuài),通(tōng)常每(měi)秒鐘(zhōng)可對數千(qiān)個(gè)細胞進(jìn)行(háng)分析。這(zhè)使得(dé)細胞(bāo)儀(yí)能夠進(jìn)行大規(guī)模的細(xì)胞(bāo)分析(xī),並且在短時間(jiān)內獲得(dé)大(dà)量(liáng)數據,特別(bié)適用於(yú)需要(yào)高通量(liáng)分析的研究領域,如(rú)癌(ái)症(zhèng)免疫治療(liáo),幹(gān)細(xì)胞研究(jiū)等。
3.細(xì)胞(bāo)排(pái)序(xù):
一些(xiē)具備細胞分選(xuǎn)功(gōng)能。細胞分選技術能夠(gòu)根據細(xì)胞的(dí)熒(yíng)光(guāng)標(biāo)記或(huò)其他(tā)特征(zhēng),將(jiāng)細胞分(fēn)離成不同(tóng)的(dí)群體並收(shōu)集起(qǐ)來。這項技(jì)術被廣泛(fàn)應用於(yú)純(chún)化(huà)特定細胞(bāo)亞群(qún),分離(lí)幹細(xì)胞(bāo),免疫細胞等。